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淺談口蹄疫的檢測
發布時間:2017-11-29|編輯:悅洋生物

口蹄疫(Foot-and-mouth disease, FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)感染引起的偶蹄動物共患的急性、熱性、高度接觸性傳染病,主要感染對象為牛、羊、豬等偶蹄類家畜及野生偶蹄動物,成年動物死亡率雖不高,但幼畜死亡率高,動物感染后發病率幾乎達100%,被OIE列為A類傳染病。FMD每次爆發后只能屠宰和集體焚毀染病牲畜以絕后患。由于FMD傳播迅速、難于防治、補救措施少,嚴重危害家畜的生產力和畜產品質量,被稱為畜牧業的頭號殺手。

然而FMD的診斷卻非常復雜。FMDV屬于RNA病毒科,口蹄疫病毒屬,有O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3(即南非1、2、3型)和Asia1(亞洲1型)7個血清型。各型之間無交叉?;し從?,感染了一型口蹄疫的動物仍可感染另一型口蹄疫病毒而發病,同型內的不同分離株的抗原性有不同程度的差別,這些特性給FMD的診斷工作帶來許多困難。特別是在注射FMD疫苗的國家和地區確診FMDV的感染更加困難,因此,及時、準確的檢測技術就變得至關重要。

隨著對FMD研究的不斷深入,FMD檢測診斷技術正在不斷的改進和創新,口蹄疫診斷技術從最早的病毒分離鑒定到血清學試驗,再到分子生物學技術,已逐漸向著更敏感、更特異、更方便、更經濟的方向發展。目前FMD的檢測技術主要有生物學試驗(包括動物試驗和細胞培養)、血清學診斷技術(包括補體結合試驗、中和試驗、凝集試驗、免疫擴散、沉淀反應、免疫電泳技術、放射免疫試驗和免疫電鏡技術及免疫膠體金快速檢測技術等)和分子生物學檢測技術(包括核酸雜交、聚合酶鏈式反應及核酸序列分析PCR)等。筆者將著重介紹目前使用較廣的膠體金免疫層析技術和酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。

膠體金快速診斷試紙條是20世紀90年代以來在單克隆抗體技術、膠體金免疫標記技術和新材料技術基礎上發展起來的一項新型體外診斷技術。其原理是將特異性抗原(或抗體)以條帶狀先固定于硝酸纖維膜上的某一區帶,將可顯色的標記物膠體金或有色乳膠微球吸附在結合墊上。當待測樣品(血清等)被加到試紙條一端的樣品墊上后,通過毛細作用向前移動,溶解固化在結合墊上的標記物并與之反應形成復合物,再移動至固定的抗原(或抗體)的區域時,待測物和標記物的復合物又與之發生特異性結合而被截留積聚下來,從而在檢測帶上出現了可以目測的顯色結果。此技術有以下優點:(1)試劑和樣品用量極小,常溫能夠長期保存;(2)無需熒光顯微鏡和酶標檢測儀等儀器,非常適合現場使用;(3)沒有有害物質(如放射性同位素、鄰苯二胺等)的參與;(4)檢測時間大大縮短,5~10min可以出結果,并且可以長期保存;(5)膠體金的敏感性可達到ELISA水平,若結合銀染色則檢測的敏感性會大大提高。

   

   酶聯免疫吸附試驗(ELISA),該方法利用酶對底物的催化反應特性,將酶與抗體偶聯并使之參與到抗原抗體反應中,依據酶催化底物所發生的變色反應程度來指示和量化抗原抗體的反應水平。ELISA克服了其他免疫學診斷方法的一些缺點,其優越之處體現在如下幾方面:(1)敏感:ELISA的反應模式基本上都是抗原抗體酶標抗抗體的方式進行的聯級放大,大幅度提高了反應信號的強度;(2)特異:每一步反應都是抗原抗體的特異性識別過程;(3)重復性好:所用材料試劑系批量生產或制備,具有良好的均一性,無生物學試驗中經常出現的個體差異現象;(4)操作便捷,易于掌握,標準化后的ELISA測試系統可組裝成能發售的診斷試劑盒,只需按說明操作即可;(5)安全:試驗不需動用活毒,無散毒的危險。ELISA試驗檢測口蹄疫具有特異、敏感、快速、簡便、可靠性好等特點,且能自動化操作,并能迅速地檢測大量樣品,在FMD的診斷中日益受到人們的重視,現已成為國際上檢測FMD使用最廣的常規方法之一。

FMD診斷過程中,需要區分FMD抗體是免疫動物產生的還是自然感染動物產生的,因為鑒別自然感染和免疫動物是OIE判定一個國家有無FMD的依據。目前的口蹄疫疫苗生產工藝,在病毒純化過程中可以去除絕大部分的非結構蛋白。滅活疫苗免疫動物后,動物體內不會有病毒增殖,因而也就沒有病毒非結構蛋白表達,也就沒有病毒非結構蛋白抗體產生。而自然感染動物體內則有病毒增殖,在病毒的裝配過程中有非結構蛋白的表達,就可以刺激機體產生相應的抗體。因此可以利用非結構蛋白抗體區分感染動物和免疫動物。目前市面上已有能檢測野毒的膠體金試紙條和ELISA試劑盒,也有能夠評價免疫抗體水平的ELISA試劑盒在國內銷售。

悅洋生物向廣大客戶提供優質進口口蹄疫檢測試劑,包括OFMD抗體檢測ELISA試劑盒、AFMD 抗體檢測ELISA試劑盒、AsiaFMD 抗體檢測ELISA試劑盒、野毒抗體檢測ELISA試劑盒和野毒抗體快速檢測卡等。


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