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浅谈口蹄疫的检测
发布时间:2017-11-29|编辑:悦洋生物

口蹄疫(Foot-and-mouth disease, FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)感染引起的偶蹄动物共患的急性、热性、高度接触性传染病,主要感染对象为牛、羊、猪等偶蹄类家畜及野生偶蹄动物,成年动物死亡率虽不高,但幼畜死亡率高,动物感染后发病率几乎达100%,被OIE列为A类传染病。FMD每次爆发后只能屠宰和集体焚毁染病牲畜以绝后患。由于FMD传播迅速、难于防治、补救措施少,严重危害家畜的生产力和畜产品质量,被称为畜牧业的头号杀手。

然而FMD的诊断却非常复杂。FMDV属于RNA病毒科,口蹄疫病毒属,有O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3(即南非1、2、3型)和Asia1(亚洲1型)7个血清型。各型之间无交叉?;し从?,感染了一型口蹄疫的动物仍可感染另一型口蹄疫病毒而发病,同型内的不同分离株的抗原性有不同程度的差别,这些特性给FMD的诊断工作带来许多困难。特别是在注射FMD疫苗的国家和地区确诊FMDV的感染更加困难,因此,及时、准确的检测技术就变得至关重要。

随着对FMD研究的不断深入,FMD检测诊断技术正在不断的改进和创新,口蹄疫诊断技术从最早的病毒分离鉴定到血清学试验,再到分子生物学技术,已逐渐向着更敏感、更特异、更方便、更经济的方向发展。目前FMD的检测技术主要有生物学试验(包括动物试验和细胞培养)、血清学诊断技术(包括补体结合试验、中和试验、凝集试验、免疫扩散、沉淀反应、免疫电泳技术、放射免疫试验和免疫电镜技术及免疫胶体金快速检测技术等)和分子生物学检测技术(包括核酸杂交、聚合酶链式反应及核酸序列分析PCR)等。笔者将着重介绍目前使用较广的胶体金免疫层析技术和酶联免疫吸附试验(ELISA)。

胶体金快速诊断试纸条是20世纪90年代以来在单克隆抗体技术、胶体金免疫标记技术和新材料技术基础上发展起来的一项新型体外诊断技术。其原理是将特异性抗原(或抗体)以条带状先固定于硝酸纤维膜上的某一区带,将可显色的标记物胶体金或有色乳胶微球吸附在结合垫上。当待测样品(血清等)被加到试纸条一端的样品垫上后,通过毛细作用向前移动,溶解固化在结合垫上的标记物并与之反应形成复合物,再移动至固定的抗原(或抗体)的区域时,待测物和标记物的复合物又与之发生特异性结合而被截留积聚下来,从而在检测带上出现了可以目测的显色结果。此技术有以下优点:(1)试剂和样品用量极小,常温能够长期保存;(2)无需荧光显微镜和酶标检测仪等仪器,非常适合现场使用;(3)没有有害物质(如放射性同位素、邻苯二胺等)的参与;(4)检测时间大大缩短,5~10min可以出结果,并且可以长期保存;(5)胶体金的敏感性可达到ELISA水平,若结合银染色则检测的敏感性会大大提高。

   

   酶联免疫吸附试验(ELISA),该方法利用酶对底物的催化反应特性,将酶与抗体偶联并使之参与到抗原抗体反应中,依据酶催化底物所发生的变色反应程度来指示和量化抗原抗体的反应水平。ELISA克服了其他免疫学诊断方法的一些缺点,其优越之处体现在如下几方面:(1)敏感:ELISA的反应模式基本上都是抗原抗体酶标抗抗体的方式进行的联级放大,大幅度提高了反应信号的强度;(2)特异:每一步反应都是抗原抗体的特异性识别过程;(3)重复性好:所用材料试剂系批量生产或制备,具有良好的均一性,无生物学试验中经常出现的个体差异现象;(4)操作便捷,易于掌握,标准化后的ELISA测试系统可组装成能发售的诊断试剂盒,只需按说明操作即可;(5)安全:试验不需动用活毒,无散毒的危险。ELISA试验检测口蹄疫具有特异、敏感、快速、简便、可靠性好等特点,且能自动化操作,并能迅速地检测大量样品,在FMD的诊断中日益受到人们的重视,现已成为国际上检测FMD使用最广的常规方法之一。

FMD诊断过程中,需要区分FMD抗体是免疫动物产生的还是自然感染动物产生的,因为鉴别自然感染和免疫动物是OIE判定一个国家有无FMD的依据。目前的口蹄疫疫苗生产工艺,在病毒纯化过程中可以去除绝大部分的非结构蛋白。灭活疫苗免疫动物后,动物体内不会有病毒增殖,因而也就没有病毒非结构蛋白表达,也就没有病毒非结构蛋白抗体产生。而自然感染动物体内则有病毒增殖,在病毒的装配过程中有非结构蛋白的表达,就可以刺激机体产生相应的抗体。因此可以利用非结构蛋白抗体区分感染动物和免疫动物。目前市面上已有能检测野毒的胶体金试纸条和ELISA试剂盒,也有能够评价免疫抗体水平的ELISA试剂盒在国内销售。

悦洋生物向广大客户提供优质进口口蹄疫检测试剂,包括OFMD抗体检测ELISA试剂盒、AFMD 抗体检测ELISA试剂盒、AsiaFMD 抗体检测ELISA试剂盒、野毒抗体检测ELISA试剂盒和野毒抗体快速检测卡等。


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